1、目的：

對微生物標準菌株的驗收、復活、確認、轉代、儲存、使用、廢棄等進(jìn)行規定，確保標準菌株符合要求，保證檢測結果。

2、職責：

2.1、檢測中心主任負責標準菌株資源的配備。

2.2、微生物檢測室工作人員負責標準菌株的有效儲存和正確的使用。

3、要求：

3.1、供應商的選擇：選擇有資質(zhì)的標準菌株的合格供應商，每批標準菌株必須有附件的供應商的合格證或檢測報告，來(lái)證明所采購的標準菌株是合格的。

3.2、標準菌株和驗收

菌株一到實(shí)驗室，一定要記錄好菌株號和標準菌株來(lái)源，確保溯源性清楚。同時(shí)，還應盡可能多的菌株信息，如：標準菌株名稱(chēng)和數量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無(wú)破損等。

3.3、凍干標準菌株的復活：

3.3.1、開(kāi)啟產(chǎn)品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，從凹口處撕開(kāi)產(chǎn)品外包裝，撕掉標簽上的拉片，將其貼于菌株保藏管上。

3.3.2、復活：選擇合適的培養基和培養條件（根據生產(chǎn)商說(shuō)明）進(jìn)行復活。凍干菌株的傳代次數不得超過(guò)5代，從標準菌株保藏中心購買(mǎi)的凍干標準菌株為第F0代。捏管帽處安瓿瓶（僅一次）使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶并輕拍之，使液體流入含小球的管底。通過(guò)擠捏壓碎小球使其與液體混合，立馬上拭子浸于水合液體。擠壓并旋轉拭子，接種于初級培養平板，接種圈的直徑約為25mm，用一無(wú)菌接種環(huán)在先前接種區域劃線(xiàn)10~20次，促使分離出單菌落。同時(shí)吸出部分菌液接種胰蛋白胨大豆肉湯管，副溶血性弧菌接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯管。將接種好的平板和管馬上 進(jìn)行培養。細菌培養溫度通常為25℃或37℃。多數凍干菌株會(huì )在幾天后長(cháng)出，但是少數菌會(huì )表現出延滯期延長(cháng)的現象，需要將正常培養時(shí)間加倍。復活后的菌株為F1代。

3.3.3、將TSB生長(cháng)的濃菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混勻后將液體吸出，將保藏管-18℃保存1~3年為標準儲備菌株F2代。將平板上生長(cháng)的良好菌株接種于營(yíng)養瓊脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化鈉營(yíng)養瓊脂）36℃培養24h當作工作菌株，為W3代，記錄為F2代。

3.3.4、工作菌株確認方法及依據：

大腸桿菌的確認依照“SN 0169-1992出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法”執行。

金黃色葡萄球菌的確認依照“SN/T 0172-2010進(jìn)出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法”執行。

沙門(mén)氏菌的確認依照“SN 0170-1992出口食品沙門(mén)氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗方法”執行。

副溶血性弧菌的確認依照“SN/T 0173-2010進(jìn)出口食品中副溶血性弧菌檢驗方法”執行。

3.4、工作菌株的儲存：

3.4.1、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、儲存在2℃~8℃的冰箱內。

3.4.2、副溶血性弧菌在常溫條件下保存。

3.4.3、儲存期限：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、副溶血性弧菌為3個(gè)月。

3.5、標準菌株的轉接：

3.5.1、標準菌株的復蘇：

① 菌種操作應在無(wú)菌條件下進(jìn)行，防止雜菌污染。

② 每次使用和復蘇時(shí)只需將小珠在平板上滾動(dòng)或置肉湯中培養。

3.5.2、標準儲備菌株每轉接一次須進(jìn)行確認。

3.5.3、工作菌株轉接的方法：

① 配制營(yíng)養瓊脂培養基（副溶血性弧菌加3%氯化鈉）并分裝在試管內，121℃高壓滅菌15分鐘后擺斜面，冷卻后備用。

② 在無(wú)菌條件下，用接種環(huán)挑取菌苔至新奇斜面上作“之”字形劃線(xiàn)接種，放置在36℃的培養箱內培養24小時(shí)。

3.6、工作菌株的使用：

3.6.1、內部質(zhì)量操縱 ：一個(gè)月一次陽(yáng)性對比 、培養基每批驗收；

3.6.2、外部質(zhì)量操縱 ：能力驗證、實(shí)驗室比對。

3.7、工作菌株的期間核查：

3.7.1、期間核查的頻率：每半年對使用標準菌株進(jìn)行一次期間核查。

3.7.2、工作菌株期間核查的方法及依據：同工作菌株的確認。

3.7.3、建立標準菌株期間核查記錄。

3.8、標準菌株的廢棄：

3.8.1、標準菌株如已老化、退化、或變異、污染等，經(jīng)確認試驗不符合的或該菌種已無(wú)使用需要的應及時(shí)銷(xiāo)毀。

3.8.2、廢棄的標準菌株由部門(mén)負責人批準，使用人員放入高壓鍋內121℃30min高壓滅菌后作為廢棄物處理。